dna損傷試劑盒的樣品和生物素標(biāo)記抗體先后加入酶標(biāo)板孔反應(yīng)后，PBS或TBS洗滌。隨后加入過氧化物酶標(biāo)記的親和素反應(yīng)；經(jīng)過PBS或TBS的*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的小鼠CD48呈正相關(guān)。
dna損傷試劑盒的樣品稀釋：
用戶須估計(jì)樣品待測因子的含量，決定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)，以使稀釋后樣品中待測因子的濃度處于ELISA試劑盒的最佳檢測范圍。根據(jù)待測因子含量高、中、低的不同，分別采取不同的稀釋方案，以下方案僅供參考，樣品的稀釋應(yīng)有詳細(xì)記錄。
高：指待測因子在40～400ng/ml。一般按1:100稀釋。297μL樣品稀釋液加3μL樣品。
中：指待測因子在4～40ng/ml。一般按1:10稀釋。225μL樣品稀釋液加25μL樣品。
低：指待測因子在62.5～4000pg/ml。按1:2稀釋。100μL樣品稀釋液加100μL樣品。
特低：指待測因子≤62.5pg/ml。樣品一般不做稀釋，或按1:2稀釋。
dna損傷試劑盒的試劑準(zhǔn)備：
小鼠標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋和使用：在使用前2小時(shí)內(nèi)準(zhǔn)備。試劑盒提供2管標(biāo)準(zhǔn)品，每管10ng，每次使用1管。
配制10,000pg/ml標(biāo)準(zhǔn)品：取1mL樣品稀釋液加入標(biāo)準(zhǔn)品管內(nèi)，蓋好后靜置10分鐘以上，然后反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解。
配制4000pg/ml標(biāo)準(zhǔn)品：取0.4mL10,000pg/ml的標(biāo)準(zhǔn)品加入有0.6mL樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻，做上標(biāo)記。
配制2000pg/ml～62.5pg/ml標(biāo)準(zhǔn)品：準(zhǔn)備6只Eppendorf管，每管加0.3mL樣品稀釋液，分別標(biāo)記上2000pg/m，1000pg/ml,500pg/ml，250pg/ml，125pg/ml，62.5pg/ml。取0.3mL4000pg/ml的標(biāo)準(zhǔn)品加入標(biāo)記2000pg/ml的管中，混勻后同樣取出0.3mL，加入下一只管中。余同此類推，直到最后一只樣品管。
注意：已經(jīng)稀釋的標(biāo)準(zhǔn)品(10,000pg/ml)，應(yīng)在12小時(shí)內(nèi)使用。-20℃冷凍保存條件下，2天內(nèi)可以使用，但不得反復(fù)凍融。
生物素標(biāo)記抗小鼠CD48抗體工作液：在使用前2小時(shí)內(nèi)準(zhǔn)備。
根據(jù)每孔需要100μL計(jì)算總的用量(實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制100～200μL)。
按1μL生物素標(biāo)記抗小鼠CD48加抗體稀釋液99μL的比例配制工作液。輕輕混勻。
親和素-過氧化物酶復(fù)合物(ABC)工作液的準(zhǔn)備：在使用前1小時(shí)內(nèi)準(zhǔn)備。
根據(jù)每孔需要100μL計(jì)算總的用量(實(shí)配時(shí)應(yīng)多配制100～200μL)。
按1μL親和素-過氧化物酶復(fù)合物(ABC)加ABC稀釋液99μL的比例配制工作液。輕輕混勻。
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