來自TriLink的Next-level體外轉(zhuǎn)錄（IVT）試劑盒

體外轉(zhuǎn)錄技術(shù)（In Vitro Transcription，IVT）是指在無細胞體系中，以 DNA 為模板，利用 RNA 聚合酶催化合成 RNA 分子的技術(shù)。其核心優(yōu)勢是無需依賴活細胞，可快速、定向生產(chǎn)高純度、高特異性的 RNA（如 mRNA、siRNA、shRNA、rRNA 等），且能通過修飾優(yōu)化 RNA 的穩(wěn)定性、翻譯效率或免疫原性，已成為分子生物學(xué)、基因治療、疫苗研發(fā)等領(lǐng)域的核心工具。

CleanCap^® IVT試劑盒：簡而不凡

TriLink的CleanCap^® IVT試劑盒通過體外轉(zhuǎn)錄及 CleanCap^® 共轉(zhuǎn)錄加帽合成 mRNA 所需的全部核心組分。極大的優(yōu)化了RNA合成與加帽流程，同時顯著提升實驗結(jié)果，是高性能RNA合成的一體化解決方案。

如需購買TriLink公司產(chǎn)品，請聯(lián)系TriLink中國總代理商欣博盛生物。

CleanCap^® 目前有兩款高效的mRNA合成Kit，無論您是IVT領(lǐng)域的新手，還是想要將蛋白表達效率-最-大化，這兩款試劑盒都可以助您一步獲得高產(chǎn)量、低dsRNA的加帽mRNA：

CleanCap^® AG (3' OMe) CleanScript™ IVT Kit ：

通用性強，無需過多優(yōu)化；采用CleanCap^® AG (3' OMe) 帽類似物，是原始CleanCap^® AG的改良版本，可實現(xiàn)更高的蛋白表達水平。

CleanCap^® M6 High Yield IVT Kit：

包含TriLink最-新的帽類似物CleanCap^® M6，相較于酶法加帽和CleanCap^® AG類似物，可以實現(xiàn)更高的蛋白表達；為了實現(xiàn)最-佳產(chǎn)率，需要對5' UTR序列進行評估。

圖一：mRNA的帽結(jié)構(gòu)會影響蛋白表達水平。采用 CleanCap M6 帽類似物的mRNA，其蛋白表達水平高于其前代產(chǎn)品（A）及酶法加帽技術(shù)(B)。

圖二：TriLink的新型RNA聚合酶可以顯著降低mRNA合成過程中dsRNA的形成。在使用 CleanCap AG（3′OMe）和 CleanCap M6 帽類似物合成未修飾或 N1 - 甲基假尿苷（N1 MePsU）修飾的 mRNA 時，CleanScribe™ RNA 聚合酶可顯著減少dsRNA的形成。

圖三：優(yōu)化的IVT方案可顯著提高 CleanCap AG（3’OMe） mRNA的產(chǎn)率。 采用TriLink的CleanScript IVT方案，CleanCap AG（3’OMe）mRNA濃度最-高可達10 mg/mL，較傳統(tǒng)方案提升高達兩倍。

圖四：脈沖進料可以進一步提高CleanCap M6 mRNA的產(chǎn)率。 經(jīng)2h脈沖進料（操作方法參考protocol）后，CleanCap M6 mRNA 的產(chǎn)率最-高可達10mg/ml，相較于傳統(tǒng)流程提升近2倍。

兩款Kit如何選擇呢？

下方表格對兩款試劑盒的特性進行了對比，兩款產(chǎn)品根據(jù)對蛋白表達水平、下游應(yīng)用及IVT操作經(jīng)驗的不同需求，提供了各自獨特的優(yōu)勢。您可以根據(jù)具體需求，選擇最-適合您的試劑盒。

訂購信息：

CleanCap^® AG (3' OMe) CleanScript™ IVT Kit中組分：

CleanCap^® M6 IVT Kit中組分：

相關(guān)產(chǎn)品

可用作對照的目錄mRNA

常見問題

Q：我該如何選擇這兩款試劑盒？

A：試劑盒的選擇取決于您期望的蛋白表達水平、下游應(yīng)用場景，以及您的 IVT（體外轉(zhuǎn)錄）實驗經(jīng)驗。

CleanCap^® AG (3' OMe) CleanScript™ IVT kit：這是一款通用性強的試劑盒，僅需少量優(yōu)化即可合成高產(chǎn)量、低雙鏈 RNA（dsRNA）的加帽 mRNA。經(jīng)證實，CleanCap® AG (3' OMe) 帽類似物比初代 CleanCap^® AG 帽類似物的蛋白表達水平更高，且已應(yīng)用于商業(yè)化獲批的 mRNA 疫苗中。

CleanCap^® M6 IVT kit（High yeild）：該試劑盒包含最-新的 CleanCap^® M6 帽類似物，適合追求比酶法加帽及前代 CleanCap^® AG 類似物更高蛋白表達的用戶。若要通過標準方案達到最-高 5 mg/mL 的產(chǎn)量，或通過補充脈沖進料方案達到 10 mg/mL 的產(chǎn)量，用戶可能需要評估自身 5'-UTR序列的兼容性。

Q：可以用這兩個試劑盒來制備不加帽的mRNA嗎？

A：對于CleanCap^® AG（3' OMe）和CleanCap^® M6 IVT試劑盒，你可以在我們提供的protocol中省略加帽步驟，從而獲得無帽mRNA，預(yù)期產(chǎn)量相近。不過，如果你的模板是“AG起始"，5'端的異質(zhì)性會更高（例如A和G的混合物）。根據(jù)無帽mRNA的應(yīng)用需求，若有需要，可通過磷酸酶處理去除5'三磷酸基團。

Q：使用 CleanCap^® M6 帽類似物合成的 mRNA，其翻譯效率與 CleanCap^® AG (3' OMe) 帽類似物及酶法加帽相比如何？

A：通過體外和體內(nèi)實驗，我們持續(xù)觀察到：與 CleanCap AG (3' OMe) 帽類似物及酶法加帽的 mRNA 相比，用 CleanCap M6 加帽的 mRNA 蛋白表達水平更高（提升幅度≥30%）。

這種蛋白表達的提升，部分原因可能是 CleanCap M6 類似物上的 N6 - 甲基化腺苷抑制了 Dcp2 介導(dǎo)的脫帽作用。

Q：5'UTR序列會對CleanCap^® M6 IVT 試劑盒產(chǎn)生什么影響？

A：我們觀察到，CleanCap M6 IVT 試劑盒的產(chǎn)量可能會受到部分 5'UTR 序列的影響。如果您對自己使用的UTR序列有顧慮，請聯(lián)系我們獲取技術(shù)支持。

Q：如何優(yōu)化 mRNA 的 5'UTR 和 3'UTR 序列？

A：mRNA 的5'UTR和3'UTR的優(yōu)化取決于您的具體研究目的，以及 mRNA 對應(yīng)的靶細胞或組織類型。

為支持這一需求，TriLink的Officinae Bio 服務(wù)提供專業(yè)的優(yōu)化服務(wù)：您只需提供您的序列和 UTR 信息，TriLink會進行密碼子優(yōu)化，以幫助實現(xiàn)最佳表達效果。

此外，查閱已發(fā)表的文獻是確定與您的應(yīng)用場景相關(guān)的UTR序列的有效方式。我們也建議開展篩選實驗，以評估翻譯效率。

如果您使用的是 TriLink的mRNA 服務(wù)，我們在 DNA 模板中集成了自主 UTR 序列選項，您可以將開放閱讀框（ORF）插入其中，從而簡化實驗流程。

詳情請聯(lián)系 TriLink中國總代理商——欣博盛生物